实验室气溶胶核酸污染导致“假阳性”频发,如何预防?
面对频频爆出的“第三方检验机构屡次暴雷”、“多家实验室频频爆出假阳性”、“为了赚钱故意制造假阳性”等新闻,在国家卫健委的高度严格要求下,我们检验科核酸检测实验室能做些什么,该做些什么?
5月23日,国家卫生健康委医政医管局监察专员郭燕介绍:“尽管核酸检测的特异性为100%,但在实际工作中,实验室可能因实验过程的操作造成污染而导致假阳性。”
检测的准确性是所有检验实验室的生命线。而造成假阳性最主要的原因是核酸气溶胶污染问题。下面就PCR实验室出现假阳性(核酸污染)的具体原因及应对措施分析如下:
一、PCR污染的监测
在日常实验室运行中,要时刻注意监测实验室的污染情况,了解实验室有无污染、污染原因、污染程度,以便采取有效措施,防止和消除污染。
一般通过设置阴性质控品来监测污染情况。
1、试验过程监测
目前,多数试剂盒的阴性对照是在配置PCR反应液,上机扩增这一环节进行质控,没有对核酸提取进行质控。
因此,每次开展试验应增加3个纯化水样品,分布于待检样品的前、中、后位次或棋盘法随机放置,参与核酸提取、扩增,保证实验样品处理、核酸提取、扩增3个步骤的全过程的阴性监控。防止整个试验过程中可能存在的阳性污染。
2、日常实验室环境监测
• 监测对象
实验室内的仪器设备、空气、物体表面;
• 环境监测
每个实验区放置10ml纯化水或生理盐水(敞口),1个小时后取样200μl,作为样品,参与提取、扩增,分析实验室环境是否存在气溶胶污染。
• 物体表面监测
物体表面擦拭取样:用棉拭子蘸取生理盐水,在实验室台面(尤其是四周死角)、仪器表面和内孔涂抹取样后,放入约0.5ml生理盐水中取样,作为样品,参与提取、扩增,分析物体表面是否存在气溶胶污染。
二、解决PCR实验室污染的方法
解决PCR实验室污染的方法:润联 2022 PCR CLEANER 策略。
1、人、机、料、法、环
首先针对上述产生气溶胶污染的原因进行分析,从人员、硬件配置、物料、方法(SOP)、环境五个方面进行认真复盘,整改。
这是保证实验室长治久安、不发生污染的基本前提。
2、发生污染时的处理
实验室一旦发生污染,检测工作应立即停止,直到确认消除污染后才能重新开始检测。首先,要查找污染源和明确污染范围。然后,根据污染源和污染范围采取有效的去污染措施,结合各种不同方法以达到最佳效果。
发生污染时,处理措施根据污染的区域来源:
• 吸附于仪器物体表面的核酸气溶胶污染
• 小空间安全柜内的核酸气溶胶污染
• 大空间中的核酸气溶胶污染
紫外线照射无法降解200bp以下的短片段核酸,作用距离以及效果非常有限,并且容易产生处理死角。
那么有没有能够在短时间内在不影响实验室工作的同时,又能完成对实验室内的核酸进行清除降解的设备?
那么有没有能够在短时间内在不影响实验室工作的同时,又能完成对实验室内的核酸进行清除降解的设备?
可以通过润联提出的“2022 PCR CLEANER 解决方案”对空气及物表中的气溶胶进行清除!详询润联张工18938962967
气溶胶核酸污染去除
清除效率高,最快可1小时解决空气中的气溶胶污染问题!“解决方案”更大的价值是,每天实验结束,打开仪器60~90分钟,能大大降低实验室的污染概率。毕竟核酸气溶胶的污染,预防大于治理!“不污染”才是最好的治理!
• 吸附在仪器、设备、耗材表面上的核酸污染处理
更换污染区的耗材(主要是吸头和离心管);实验服、工作服应用次氯酸盐溶液浸泡1小时后,进行洗涤处理;尽量使用一次性生物安全Ⅱ级防护服。
可以选用没有腐蚀性、对试验人员及环境友好、无刺激的核酸清除剂,如润联提供的“NOVOCIDE核酸污染清除剂”。主要原理是通过氧化作用,清除效果强,已在多个国家级疾控使用,比其他传统的酶解法、常见的强氧化剂(次氯酸盐)降解效果更好!更加安全!不含生物酶,无腐蚀性,无致畸、致癌性。该试剂可以处理易腐蚀的区域,如在移液器、生物安全柜、离心机、传递窗等区域通过设备或直接进行喷洒清除。
气溶胶核酸污染去除
通过设备处理后的空间,直接通风即可完成整个去污流程,无需擦拭,极大地缩短了工作时间。
注意:试验耗材、工作衣等进行121℃30分钟高压,虽然有一定的作用,但并不能完全去除质粒核酸的污染。严禁PCR扩增产物进行高压,尤其是在2区进行高压,高压蒸汽非常容易造成扩增产物气溶胶扩散。详询张工18938962967